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Laboratoire de chimie biologique et de la nutrition [Laboratory of Biochemistry and Nutrition] (LCBN)
Faculté de Médecine - Campus Erasme (unité ULB194)

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Le Laboratoire de Chimie Biologique et de la Nutrition s'intéresse particulièrement à la biochimie des protéines et des peptides régulateurs, dont : => l'étude des neuropeptides et peptides, tels que le VIP, PACAP, glucagon, GLP-1, GIP, ghreline et obestatine. Les aspects abordés sont leurs récepteurs membranaires, les voies de signalisation, leurs effets sur la prolifération et la différenciation cellulaires, l'apoptose et le contrôle transcriptionnel de l'expression du récepteur au glucagon. Ces études comportent la synthèse de ligands originaux agonistes et antagonistes sélectifs permettant l'identification des récepteurs, l'élaboration d'anticorps spécifiques anti-récepteurs, l'étude de la reconnaissance de récepteurs chimériques et mutés, l'activation par le glucose du promoteur du gène codant pour le récepteur à glucagon etc... => l'étude des aquaporines (AQPs, protéines transmembranaires perméables à l'eau), et des aquaglycéroporines (perméables à l'eau et au glycérol) dans des pathologies inflammatoires et métaboliques (y compris états de carence ou excès en nutriments). Ces études comportent la production d'anticorps anti-AQPs à l'aide de peptides synthétiques, la mesure des taux d'expression des AQPs (ARNm et protéine), la mise en évidence des localisations cellulaire et tissulaire des AQPs, la mesure de flux d'eau au travers d'un épithélium polarisé. M. Svoboda a, dans le cadre de programmes de coopération de la CUD (''Coopération Universitaire au Développement'') avec l'UMSS et d'autres universités Sud Américaines (Bolivie, Chili), acquis une expertise reconnue dans l'étude des génotypes de T. cruzi dans le cadre de la transmission congénitale et la pathologie de la maladie de Chagas. [The ''Laboratoire de Chimie Biologique et de la Nutrition'' is essentially focused on proteins biochemistry and regulatory peptides, the current research areas being: => the study of peptides and neuropeptides, such as VIP, PACAP, glucagon, GLP-1, GIP, ghrelin and obestatin. The topics investigated include their membrane receptors, signaling pathways, effects on cell proliferation, differentiation and apoptosis, as well as the transcriptional control of the glucagon receptor expression. These studies involve 'in house' synthesis of original ligands, including selective agonists and antagonists used for receptor classification, specific antibodies against the receptors and ligands, the study of chimeric and mutated receptors recognition, the investigation of glucose-induced activation of the glucagon receptor gene promoter, etc. => the study of aquaporins (AQPs, transmembrane water channels) and aquaglyceroporins (water and glycerol channels) in inflammatory and metabolic diseases, including nutrient excess or deficiency. These studies call for the production of antibodies against AQPs, the measure of the AQPs expression level (mRNA and protein), the study of their subcellular and tissue localization, and the measure of water flux through a polarized epithelium. Thanks to the laboratory's involvement in the CUD cooperation programs (University Cooperation Development Programs) with UMSS and other South American Universities (Bolivia, Chile), we developed an large expertise in the study of T. cruzi genotypes in the congenital transmission and in the pathology of the Chagas disease.]
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coordonnées

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Laboratoire de chimie biologique et de la nutrition [Laboratory of Biochemistry and Nutrition] |
 | tel +32-2-555.62.29, fax +32-2-555.62.30, mawaelbr@ulb.ac.be |
 | Campus Erasme, Bat. G/E, Aile E, niveau 6, local E1.6.207 |
 | CP611, route de Lennik 808, 1070 Bruxelles |

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responsables

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Prof. Magali WAELBROECK-FRAUMAN Prof. Christine DELPORTE Prof. Jason PERRET Prof. Joanne RASSCHAERT Prof. Michal SVOBODA Prof. Pascale VERTONGEN

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composition

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Tatjana ARSENIJEVIC Anitha BATAMURIZA Nargis BOLAKY Ngoc-Diem BUI Johnny CNUDDE Nathalie GASPARD Françoise GREGOIRE Sarah HERNU Sarah JANSSENS Bahija JELLOULI-FARES Maité LIENART Elie MOTULSKY Isabelle PIENS Shahnawaz SOYFOO Michèle TASTENOY

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projets

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Etude des récepteurs des peptides de la famille glucagon-VIP-PACAP. Conception de nouveaux ligands. [Study on receptors for the parent peptides glucagon-VIP-PACAP. Design of new ligands.]
Développement et synthèse de peptides agonistes et antagonistes, sélectifs, agissant sur les récepteurs du glucagon, du VIP et du PACAP. Test des peptides sur récepteurs recombinants. Recherche par SCAM et mutagenèse dirigée des zones de contacts entre le récepteur et le ligand en vue de la validation de modèles de l'interaction. Obtention d'anticorps monoclonaux contre les récepteurs. Interactions récepteurs-effecteurs. [Development and synthesis of selective agonists and antagonists for the glucagon, VIP and PACAP family of peptides. Testing of these molecules on recombinant receptors. Identification by SCAM and site-directed mutagenesis of the contacts between the receptor and its ligand, and validation of interaction models. Development of monoclonal antibodies against the VPAC1 and VPAC2 receptors. Interaction with effectors.]
Activation par le glucose du promoteur du gène codant pour le récepteur à glucagon. Recherche de facteurs régulatant la transcription. [Glucose induced activation of the promoter of the glucagon receptor gene. Identification of transcriptional regulatory factors.]
Clonage et expression des éléments régulateurs du promoteur du récepteur à glucagon. Transfection des cellules pancréatiques INS-1 par les plasmides contenant un gène rapporteur sous le control des éléments régulateur du glucose. Etude des effets du glucose et de ses métabolites. Recherche de facteurs nucléaires spécifiques régulant la transcription. [Cloning and expression of regulatory elements of glucagon receptor promoter. Transfection of pancreatic INS-1 cells by plasmids harbouring reporter gene under control of glucose regulatory elements. Effect of glucose and its metabolites. Search for specific nuclear factors regulating the transcription.]
Evaluation des paramètres de synthèse peptidique sur support solide. Purification et analyse qualitative des peptides synthétisés. [Assessment of the solid support peptides synthesis conditions. Purification and qualitative analysis of the synthesized peptides.]
Recherche des conditions optimales de synthèse sur support solide des peptides. Analyse des facteurs limitant le rendement de telles synthèses. Purification de ces peptides par HPLC en parallèle avec la spectrométrie de masse et l'électrophorèse capillaire. [Solid support peptide synthesis conditions are investigated in order to optimize the synthesis yield. Peptides synthesized like this are purified through HPLC technique using mass spectrometry and capillary electrophoresis to access the quality of the synthesis.]
L'obestatine, un peptide anti-obésité : expression, production, dégradation, maturation de sa pro-hormone. [Obestatin, an anti-obesity peptide: expression, production, degradation, pro-hormone processing.]
Objectifs généraux du projet:Définir : a) la biochimie cellulaire de l'obestatine en étudiant son expression, sa production, la maturation de sa prohormone et sa dégradation et b) le mode d'action de l'obestatine en étudiant sa régulation croisée avec la ghréline. [General objectives of the project:Define: a) the cell biology of obestatin by studying its expression, production, processing of its prohormone, and degradation and b) the mode of action of obestatin by studying its cross regulation with ghrelin.]
Aquaporines : expression et rôle dans des pathologies inflammatoires et métaboliques. [Aquaporins : expression and role in inflammatory and metabolic pathologies.]
Etude de la distribution, de l'expression et de la fonction des aquaporines dans le syndrome de Sjögren, les uvéites autoimmunes, états de carences ou excès en nutriments et de cellules en culture. [Study of the distribution, expression and function of the aquaporins in Sjögren's syndrome, autoimmune uveitis, nutriments perturbations, and in cell culture.]
Polymorphisme moléculaire de Trypanosoma cruzi et la transmission congénitale du parasite. [Molecular polymorphism of Trypanosoma cruzi and congenital transmission]
Amplification des fragments d'ADN de T. cruzi dans le sang des nouveaux-nés des mères chagasiques. Typification des souches par l'analyse des de l'ADN polymorphe amplifié. Comparaison mère-bébé. [Amplification of DNA fragments from blood of newborns of chagasic mothers. Typing of strains by analysis of amplified polymorphic DNA. Comparison mother-newborn.]
Identification par ''microarray'' des gènes dont l'expression est modifiée par une carence protéique. [Microarray and protein deficiency.]
La malnutrition sévère s'accompagne de perturbations métaboliques importantes, de troubles neurologiques et de modifications des fonctions digestives. Plusieurs neuropeptides produits à la fois par le système nerveux central et par le tube digestif et agissant sur le comportement, les fonctions digestives, le métabolisme intermédiaire et l'homéostasie métabolique, pourraient être directement impliqués dans la physiopathologie des troubles résultant de la malnutrition et dans l'évolution métabolique lors de la restauration d'une alimentation normale. Par ''microarrays'', nous rechercherons les gènes exprimés dans le foie, le pancréas et le cerveau dont l'expression est modifiée par la carence en protéines ou en acides gras essentiels. [Severe malnutrition induces important metabolic disruptions, neurologic troubles and modifications of digestive functions. Several neuropeptides produced by the central nervous system and by the digestive tract may be directly implicated in the physiopathology of the troubles resulting from malnutrition, and also in the metabolic evolution when a normal feeding is restored. We are studying by microarrays the modifications of gene expression due to protein or essential fatty acids deficiency.]

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publications

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theses

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Myrna Virreira (2007).DNA Polymorphism in Congenital Infection of Trypanosoma cruzi: diagnostic and epidemiological interest Dir. Prof. M. Svoboda, Laboratoire de Chimie Biologique et de Nutrition, ULB, Bruxelles, 2007
Langlet, C. (2007) Contribution à l'étude de la phosphorylation et de l'internalisation des récepteurs VPAC Dir. Prof. P. Robberecht, Laboratoire de Chimie Biologique et de la Nutrition, ULB, Bruxelles - Doctorat, 2007
De Vriese, C. (2006), ''Etude de l'expression, de la production et de la dégradation de la ghréline'', Dir. Prof. C. Delporte, Laboratoire de Chimie Biologique et de Nutrition, ULB, Bruxelles, 2006
Portois, L. (2001), ''Etude de la régulation de l'expression du gène du récepteur à glucagon de rat par le glucose'', Dir. Prof. M. Svoboda, Laboratoire de Chimie Biologique et de la Nutrition, ULB, Bruxelles, 2001
Eskinazy, R. (2000), ''Contribution à l'étude de la carcinogénèse colique'', Dir. Prof. P. Robberecht, Laboratoire de Chimie Biologique et de la Nutrition, ULB, Bruxelles, 2000
Van Rampelbergh, J. (1999), ''Contribution à l'étude des domaines fonctionnels des récepteurs du VIP'', Dir. Prof. P. Robberecht, Laboratoire de Chimie Biologique et de Nutrition, ULB, Bruxelles, 1999
Langer, I. (1999), ''Contribution à l'étude des propriétés antiangiogéniques de la Suramine et de deux analogues : le Noir Eriochrome T et le S18699'', Dir. Prof. P. Robberecht, Laboratoire de Chimie Biologique et de Nutrition, ULB, Bruxelles, 1999
Libbrecht, V. ''Contribution à l'étude des petites GTPases de la superfamille RAS dans les cellules pancréatiques'', Dir. Prof. A. Bollen, Service de Génétique Appliquée, ULB, Nivelles, 1997
Vertongen, P. (1997), ''Contribution à l'étude du rôle du PACAP et du VIP dans le cerveau ainsi que dans des tumeurs d'origine neuroectodermique et hypophysaire'', Dir. Prof. P. Robberecht, Laboratoire de Chimie Biologique et de Nutrition, ULB, Bruxelles, 1997
Vilardaga, J.P. (1996), ''Contribution à l'étude des récepteurs aux hormones gastrointestinales : relation structure - activité du récepteur de la sécrétine'', Dir. Prof. P. Robberecht, Laboratoire de Chimie Biologique et de la Nutrition, ULB, Bruxelles et Prof. A. Bollen, Service de Génétique Appliquée, ULB, Nivelles, 1996
Van Laethem, J.L. (1996), ''Contribution à l'étude étiopathogénique des maladies du pancréas'', Dir. Prof. P. Robberecht, Laboratoire de Chimie Biologique, ULB, Bruxelles, 1996
Gourlet, P. (1994), ''Contribution à l'étude moléculaire et pharmacologjque des récepteurs du VlP, de l'hélodermine et des PACAP'', Dir. Prof. P. Robberecht, Laboratoire de Chimie Biologique et de la Nutrition, ULB, Bruxelles, 1994

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collaborations

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Prof. A. Herchuelz, ULB, Laboratoire de Pharmacodynamie, Bruxelles, Belgique
Prof. T. Peeters and I. Depoortere, Katoliek Universiteit te Leuven, Laboratoire de Gastro-entérologie Expérimentale, Leuven, Belgique
Prof. Y. Carlier, ULB, Laboratoire de Parasitologie, Faculté de Médecine, Bruxelles, Belgique
Prof. F. Torrico, UMSS, LABIMED, Facultad de Medicina, Cochabamba, Bolivie
Dr. L. Maldonaldo, UMSS, Chirurgie digestive, Hospital Viedma, Facultad de Medicina, Cochabamba, Bolivie
Prof. O. Devuyst, UCL, Unité de Néphrologie, Bruxelles, Belgique
Drs B.J. Baum and I.S. Ambudkar, National Institutes of Health, Gene Therapy and Therapeutic, Bethesda, Etats-Unis (USA)
Prof. P. Agre, Johns Hopkins University, Department of Biological Chemistry, Baltimore, Etats-Unis (USA)
Professeur Qihe Xu, King's College London, Department of Renal Medicine. The Rayne Institute, London, Grande-Bretagne
Drs F. Willermain and L. Caspers, Hopital St Pierre, Service d'Ophtalmologie, Bruxelles, Belgique
Dr. M.D. Martin-Martinez, CMP, CMP, Bruxelles, Belgique
Prof. Y.A. Carpentier, Université Libre de Bruxelles, Service de Chirurgie Expérimentale L. Deloyers, Bruxelles, Belgique
Prof. C. Mathieu, Katholiek Universiteit, LEGENDO, Leuven, Belgique
Prof. R. Beauwens, Université Libre de Bruxelles, Laboratoire de Physiologie Cellulaire et Moléculaire, Bruxelles, Belgique
Prof. S. Meuris, A. Sener, W. Malaisse, Université Libre de Bruxelles, Laboratoire d'Hormonologie Expérimentale, Bruxelles, Belgique

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prix

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Prix Scientifique Bio-Therabel Astra (1996) - Patrick ROBBERECHT
Prix Galien de Pharmacologie (1986) - Magali WAELBROECK-FRAUMAN
Membre du Bureau de la ''Belgium Society of Biochemistry and Molecular Biology'' - Magali WAELBROECK-FRAUMAN
Bourse de Voyage 1995 de la Section de New-York des Anciens Etudiants de l'Université Libre de Bruxelles - Christine DELPORTE
Prix triennal Auguste Slosse de l'Université Libre de Bruxelles (1996) - Christine DELPORTE
Prix pour le meilleur poster des étudiants licenciés et bousiers post-doctorants à la ''Summer Neuropeptide Conference'' (20-24 juin 1993, Martha's Vineyard (Boston), U.S.A.) - Christine DELPORTE
Membre du Conseil et de la Commission Permanente de l'Enseignement et de la Recherche de l'ISEPK - Christine DELPORTE
Bourse de voyage postdoctorale du ''National Institute of Dental Research'', Bethesda (Maryland), U.S.A. (1996) - Christine DELPORTE
Prix biennal Achille Herlant de l'Université Libre de Bruxelles (2001) - Ingrid LANGER
Prix triennal Auguste Slosse de l'Université Libre de Bruxelles (2004) - Ingrid LANGER

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savoir-faire/équipements

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Compteur de radioactivité (beta et gamma)
 Detection de l'expression d'aquaporines et d'aquaglycéroporines par PCR et Western blot
 Gel-Doc
 Nanodrop, Bioanalyseur, machines PCR, machine Q-PCR
 Ultra centrifugeuses
 Analyse par spectrométrie de masse d'échantillon en solution utilisant une 'Platform II Fison'' de chez Micromass (Waters).
 Bioanalyseur (ARN, ADN, ...)
 Clonage et séquençage des gènes.
 Clonage, mutagenèse, constructions chimériques, expression stable et transitoire dans des cellules de mammifère, de récepteurs couplés aux protéines G (GPCR).
 Culture cellulaire des cellules de mammifère et des parasites unicellulaires.
 Détection de protéines par Western blot
 Etablissement des critères de pureté par électrophorèse capillaire.
 Evaluation de la capacité des molécules à interagir avec des récepteurs hormonaux : Cultures cellulaires, lignées recombinantes exprimant des récepteurs apparentés au récepteur du VIP, des récepteurs muscariniques, des récepteurs du glucagon et des récepteurs du GLP-1
 Evaluation de la sélectivité d'antagonistes muscariniques : liaison aux 5 sous-types de récepteurs recombinants.
 Gel-Doc.
 Mise en évidence de l'expression des aquaporines et aquaglycéroporines par PCR et Western blot.
 Purification de protéines.
 Purification par HPLC
 RT-PCR et PCR quantitative
 Radioimmunodosages de Ghréline et obestatine.
 Synthèse peptidique sur support solide jusqu'à 12 peptides en parallèle via un synthétiseur PTi multiplex Symphony.
 Techniques de base d'immunohistochimie et immunofluorescence
 Transfection de gènes dans les cellules en culture
 Transfert ciblé de gènes à l'aide de vecteurs viraux.
 techniques de base d'immunohistochimie

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mots clés compréhensibles déclarés

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aquaporines (canaux perméables à l'eau) biologie moléculaire de t. cruzi purification de protéines récepteurs hormonaux synthèse de peptides

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disciplines et mots clés déclarés

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Biochimie Biologie moléculaire Chimie macromoléculaire Endocrinologie Métabolisme Pharmacologie moléculaire et cellulaire Sciences biomédicales Techniques séparatives
aquaporines cerveau chromatographie hplc clonage moléculaire contrôle de la transcription des gènes diagnostic pcr electrophorèse capillaire facteur nucléaire foie glucagon malnutrition maturation métabolisme micropuces mutagenèse dirigée obestatine PACAP polymorphisme génétique de t. cruzi récepteur à glucagon récepteurs spectrométrie de masse syndrome de Sjögren synthèse peptidique synthèse sur support solide transmission congénitale de t. cruzi uveite vip

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